計數顯色培養基的用法及用量說明
計數顯色培養基是一類利用微生物自身代謝產生的酶與相應顯色底物反應顯色的原理來檢測微生物的新型培養基。它是一種新型分離培養基,利用顯色培養基進行微生物的篩選分離,其反應的靈敏度和特異性大大優于傳統培養基。這些相應的顯色底物是由產色基因和微生物部分可代謝物質組成,在特異性酶作用下,游離出產色基因顯示一定顏色,直接觀察菌落顏色即可對菌種作出鑒定。
計數顯色培養基復蘇菌種前應準各適于該菌種生長的固體、液體培養基和培養設備,所有操作均應在符合生物安全保護及無菌條件下進行。啟開菌種宜采用鋸開法(鋸開前用75%酒精棉消毒菌種管外壁)。用吸管將液體培養基0.3ml左右注入被啟開的菌種安瓶中并吹打,使安瓶中的凍干菌種溶解成菌懸液。
將上述菌懸液全部吸出,分別接種到固體斜面和液體培養管中,一般放置在37℃培養箱培養18~24小時。對需要特殊培養條件的細菌,如需5%~10%CO2或厭氧條件等,應分別于CO2培養箱或厭氧培養箱中培養。
計數顯色培養基用法:
稱取本品23.5克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至45-50℃待用;
傾注法:
取適當稀釋度的樣品液1ml加入無菌平皿中,再加入冷卻好的計數顯色培養基約15ml,混合均勻,待培養基*凝固后,36℃培養24~48h進行計數;
涂布法:
取冷卻至45-50℃培養基,傾入無菌平皿,待培養基*凝固后,在36℃的培養箱中倒置放置1-2小時,加入適當稀釋度的樣品液1ml,涂布于培養基上,36℃培養24~48h進行計數。
操作步驟:
1、按國家標準、SN標準、FDA標準或其它方法制備樣品液;
2、取樣品液1ml加入冷卻至45-50℃顯色培養基中混勻或涂布于平板上;
3、36℃培養24~48h,選用有30~200個菌落的平板,計數顯色培養基的計數平板上出現的紅色菌落(不論其大小和顏色深淺均計數)。